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为您的应用选择正确的光源

当一台新显微镜加入我们的工厂时,我们始终会仔细检查光源(LS)的问题,因为对于所有应用程序都没有简单而通用的解决方案。关于LS的最适合的问题分为以下几个更具体的问题:强度,频谱,与示波器的耦合,由第三方软件进行的控制,随着时间和整个生命周期的稳定性,成本和维护成本,功耗,占地面积和回收利用。下面我们将给出一些最近做出的选择的示例。

活细胞实验需要少量的激发光,以避免光致漂白和光毒性。相反,当速度很重要或需要照亮较大的视野时,可能需要更强的光源。在专为对活细胞进行长时间延时研究而设计的广角显微镜上,我们选择安装基于LED的设备,以提供四种经典荧光蛋白ECFP,EGFP,EYFP和mCherry的波长。LED还可以在照明波长之间实现非常快速的切换。尽管如此,我们的幻灯片扫描仪和荧光显微镜都配备了(高达200W)基于金属卤化物的LS,其提供与我们测试的LED系统相同或更强的照明,尤其是用于激发红色和远红色染料。在幻灯机上,强光可以减少曝光时间,当数百张幻灯片中获得数千张图块时,这一点很重要。通常将样品固定并用非常稳定的有机染料染色,在这里光漂白绝对不是问题。在我们的宏观范围内,必须对解剖的器官的大区域进行照明(例如,用于可视化荧光肿瘤,或追踪大范围的脑区域,这些区域由荧光狂犬病病毒转导的神经元建立的连接),在这里,光源越强,检测组织内信号的机会越高。

光源的光谱必须与将用于实验的荧光团(和滤光片组)匹配。在需要一台仪器满足大量应用和用户的设施中,偏爱具有许多波长的光源(就像容纳大量位置的滤光轮的系统一样)。我们最近对系统进行了升级,以进行RNA和DNA FISH实验,在同一样品上同时使用多种染料,并且信号来自很小且通常非常暗淡的点。我们别无选择,选择带有内置滤光轮的金属卤化物LS,它提供了灵活性和足够的功率,可以激发整个可见光谱中的许多不同的荧光团(示波器还配备了发射滤光轮) 。不幸的是,所有测试的LED-LS系统都无法在550-600nm范围内提供足够的功率,或者没有足够的不同波长来最佳地适合我们所有的滤光片组。但是,我们当前解决方案的缺点是,随着灯泡的老化,照明会变得更弱,液体光导也必须定期更换。

光源必须与示波器兼容,即必须配备专用准直器和光导。可以直接安装在示波器上的光源很方便,但通常强度较低,以避免使用基于风扇的冷却系统,该系统会产生振动并最终使图像模糊。我们最近购买了简单的荧光显微镜,其中的LED直接集成到我们的细胞培养实验室的示波器中,但是对于我们所有其他基于高端LED的系统,我们使用带有液体光导的设备将光传输到示波器中。

几个月的稳定性和光源的使用寿命很重要,并且在运行设施时不必更换灯泡通常会非常有利。因此,我们所有的激光扫描共聚焦镜都配备了LED-LS,用于通过目镜观察样品,因为LED的使用寿命非常长,并且适合于短暂的开关操作以进行检查。与传统的汞灯泡相比,该解决方案还更加生态。

总之,我们在我们的设施中使用了多种不同光源的调色板,这反映了应用程序和显微镜技术的高度多样性。


发布于2020-12-07